Abby 是美国 ProteinSimple 公司(Bio-Techne 集团旗下品牌)推出的一款全自动蛋白质表达定量分析系统,属于 Simple Western 家族的最新成员。该系统基于毛细管电泳免疫分析技术,彻底颠覆了传统 Western Blot 的实验流程。
Abby 将传统 Western Blot 的繁琐步骤——制胶、电泳、转膜、封闭、孵育、洗涤、检测及数据分析——全部整合于一个自动化平台中。用户只需加载样品和试剂,Abby 即可自动完成蛋白质分离、免疫检测和定量分析,在 3 小时内即可获得 25 个样品的完整定量结果。
该系统被广泛应用于蛋白质性质鉴定、蛋白质表达定量分析、蛋白质修饰和差异表达研究、抗体研究、信号通路分析等多个领域。
Abby 的核心技术是一种基于毛细管的自动化免疫分析方法:
上样:样品、分离基质、 stacking 基质和抗体从特制微孔板中自动吸取,进入毛细管(5 cm 长,100 μm 内径,400 nL 体积)
分离:施加电压,蛋白质根据分子量大小在毛细管中进行电泳分离(分离总距离 ≥ 3 厘米),整个过程实时监控并以影像形式保存
固定:UV 紫外光源照射,将蛋白质共价交联固定在毛细管内壁上,基质被清除
免疫检测:自动进行一抗孵育(≤35 min)、HRP 标记二抗孵育,化学发光底物反应
信号采集:高灵敏 CCD 相机随时间序列捕获化学发光信号
Abby 独有的 RePlex 技术可在同一根毛细管中进行两轮免疫检测:第一轮检测完成后,专用试剂去除已结合的抗体,保留固定在毛细管壁上的蛋白质样品,即可进行第二轮检测。这一技术可实现:
总蛋白归一化:将目标蛋白信号归一化至总蛋白含量,比传统内参蛋白归一化更可靠
多靶点检测:从同一样品中获得更多蛋白质表征数据
节省珍贵样品:无需额外消耗样品即可获得多重信息
| 传统 Western Blot | Abby 全自动系统 |
|---|---|
| 制胶、跑胶、转膜、封闭、孵育、显色等 10+ 步人工操作 | 仅需上样,其余全自动完成 |
| 每一步都引入人为操作误差 | 无人为干预,标准化流程 |
| 耗时长:6-8 小时甚至过夜 | 3 小时完成 25 个样品 |
| 重复性差:CV > 35% | 重复性优:CV < 10% |
上样量:仅需 3 μL 样品/孔
蛋白浓度:0.3-1.2 μg/μL,总蛋白 0.6-1.2 μg 即可检测
微量珍贵样品适用:原代细胞、神经细胞、干细胞、流式分选细胞、穿刺样本等
分子量范围:2 - 440 kDa,覆盖从小肽到大分子量蛋白
分辨精度:MW > 20 kDa 时变异系数 CV ≤ 15%,MW < 20 kDa 时 CV ≤ 15-20%
定量精度:定量 CV < 20%,3-4 个数量级动态范围
| 参数 | 规格 |
|---|---|
| 样本通量 | 13 或 25 个独立样品/次 |
| 样品通道独立性 | 每个通道可使用不同抗体检测不同靶蛋白 |
| 运行时间(化学发光) | < 3 小时 |
| 运行时间(RePlex 双重检测) | 5 小时 |
Abby 配套的 Compass 软件提供全自动数据分析:
无需人工圈条带:软件自动识别蛋白条带,计算出信噪比、峰面积等数据
多种呈现形式:条带图(Lane View)、电泳图谱(Electropherogram View)
绝对定量:设置标准品后自动绘制标准曲线,计算绝对浓度
总蛋白归一化:RePlex 技术实现总蛋白归一化定量
合规性:软件符合 CFR 21 Part 11 认证,可提供 IQ/OQ 认证服务
化学发光检测灵敏度达 低皮克(low pg)级别,可检测传统 Western 难以发现的低丰度蛋白质。
| 项目 | 规格参数 |
|---|---|
| 型号 | Abby |
| 制造商 | ProteinSimple(Bio-Techne 品牌) |
| 检测技术 | 毛细管电泳免疫分析(Simple Western) |
| 检测方式 | 化学发光检测(HRP 标记二抗) |
| 样品通量 | 13 或 25 个样品/次 |
| 样品体积 | 3 μL/孔 |
| 上样蛋白量 | 0.3-1.2 μg(化学发光) |
| 分子量范围 | 2 - 440 kDa |
| 分子量 CV | < 10%(MW > 20 kDa) |
| 定量 CV | < 20% |
| 动态范围 | 3-4 个数量级 |
| 灵敏度 | 低皮克(pg)级别 |
| 运行时间(化学发光) | < 3 小时 |
| 运行时间(RePlex) | 5 小时 |
| 毛细管规格 | 5 cm 长,100 μm 内径,400 nL 体积 |
| 分离电压 | > 350 V |
| 分离总距离 | ≥ 3 cm |
| 抗体孵育时间 | ≤ 35 min |
| 封闭时间 | ≤ 10 min |
| 尺寸(闭合) | 0.36 m H × 0.36 m W × 0.57 m D |
| 重量 | 21 kg |
| 电源 | 120/240 V AC,50/60 Hz |
| 工作温度 | 18-24 °C |
| 对比项 | 传统 Western Blot | Abby 全自动系统 |
|---|---|---|
| 制胶 | 需要制胶或预制胶 | 无需制胶 |
| 转膜 | 转膜步骤繁琐,效率不均 | 无需转膜,UV 原位固定 |
| 手动操作时间 | 数小时人工操作 | 15 分钟上样,其余自动化 |
| 总耗时 | 6-8 小时甚至过夜 | 3 小时 |
| 样品需求量 | 20 μL,50-100 μg | 3 μL,0.6-1.2 μg |
| 重现性(CV) | > 35% | < 10% |
| 数据分析 | 手动圈条带,主观性强 | 软件自动定量分析 |
| 多靶点检测 | Stripping 再杂交,蛋白损失 | RePlex 技术,同一毛细管双重检测 |
| 总蛋白归一化 | 需额外实验 | RePlex 实现单次实验归一化 |
| 应用领域 | 典型应用 |
|---|---|
| 癌症与免疫肿瘤 | 肿瘤标志物分析、信号通路研究 |
| 细胞与基因治疗 | 质量控制、产品表征 |
| 外泌体研究 | 外泌体蛋白表达分析 |
| 神经科学 | 神经细胞蛋白定量 |
| 感染性疾病 | SARS-CoV-2 研究、抗体血清学分析 |
| 小分子药物研究 | 靶点结合、药效评估 |
| 植物科学 | 植物蛋白表达分析 |
| 基因治疗 | AAV 载体蛋白分析 |
| 靶向蛋白降解 | PROTAC 筛选与验证 |
ProteinSimple Abby 全自动蛋白质表达定量分析系统凭借其毛细管电泳免疫分析技术、3 小时完成 25 个样品的超快速度、3 μL 微量上样、< 10% 的卓越重现性以及 RePlex 双重检测技术,已成为蛋白质表达定量分析领域的革命性工具。
自动化与标准化:消除人为操作误差,确保数据可靠可重复
微量样品兼容:3 μL 微量上样,适用于珍贵样品
高通量与快速:25 个样品/次,3 小时完成
精确定量:软件自动分析,直接输出定量数据
灵活性与多靶点:RePlex 技术支持总蛋白归一化和双重检测
宽分子量覆盖:2-440 kDa,满足绝大多数蛋白检测需求
无论是抗体药物研发中的质量控制、外泌体蛋白分析、信号通路研究,还是珍贵细胞样品的表达谱分析,Abby 都能提供快速、精准、标准化的蛋白质定量解决方案。